酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合的固相免疫檢測技術(shù)，通過酶催化底物顯色反應(yīng)實(shí)現(xiàn)定性或定量分析。以下是其核心要點(diǎn)：

　　基本原理

　　?固相載體結(jié)合?：抗原或抗體通過物理吸附固定在聚苯乙烯微孔板表面，形成固相免疫復(fù)合物?。

　　?酶標(biāo)記放大?：酶標(biāo)記的抗原/抗體與待測樣本中的目標(biāo)物結(jié)合，通過酶催化底物(如TMB)顯色，顏色深淺與目標(biāo)物濃度成正比?。

　　?信號(hào)檢測?：使用酶標(biāo)儀測定吸光度(OD值)，實(shí)現(xiàn)定量分析?。

　　主要方法

　　?雙抗體夾心法?：適用于大分子抗原(如HBsAg)，需兩種特異性抗體分別作為捕獲抗體和檢測抗體?。

　　?間接法?：用于抗體檢測，通過酶標(biāo)二抗放大信號(hào)(如HIV抗體檢測)?。

　　?競爭法?：適用于小分子物質(zhì)(如激素)，待測物與酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合抗體，信號(hào)與濃度成反比?。

　　實(shí)驗(yàn)步驟

　　?包被?：抗原/抗體固定于微孔板(4℃過夜)?。

　　?封閉?：使用BSA或脫脂奶粉封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)?。

　　?加樣與孵育?：加入待測樣本及酶標(biāo)抗體，37℃孵育30-60分鐘?。

　　?洗滌?：去除未結(jié)合物質(zhì)，減少背景干擾?。

　　?顯色與終止?：加入底物(TMB)顯色，硫酸終止反應(yīng)后測定OD值?。

　　應(yīng)用領(lǐng)域

　　?醫(yī)學(xué)診斷?：傳染病(HIV、乙肝)、腫瘤標(biāo)志物檢測?。

　　?食品安全?：農(nóng)藥殘留、過敏原分析?。

　　?科研?：細(xì)胞因子、激素水平測定?。

　　技術(shù)特點(diǎn)

　　?高靈敏度?：可檢測納克級(jí)物質(zhì)，化學(xué)發(fā)光ELISA達(dá)飛克級(jí)?。

　　?標(biāo)準(zhǔn)化操作?：全自動(dòng)系統(tǒng)提升檢測效率，減少人為誤差?。

　　?多類型適配?：根據(jù)目標(biāo)物特性選擇直接法、夾心法或競爭法?。

　　注意事項(xiàng)

　　?質(zhì)量控制?：設(shè)置陰陽性對照，避免假陽性/陰性?。

　　?干擾因素?：封閉不充分可能導(dǎo)致非特異性吸附?。

　　?結(jié)果復(fù)核?：陽性樣本建議通過Western blot或核酸檢測確認(rèn)