脂肪酶活性的測(cè)定方法多樣，主要基于其催化脂肪水解生成游離脂肪酸或甘油的原理。下面是常用方法及操作要點(diǎn)：

　　一、滴定法(酸價(jià)法)

　　?原理?

　　脂肪酶水解底物(如橄欖油)生成游離脂肪酸，通過(guò)酸堿滴定(NaOH)測(cè)定酸價(jià)變化，計(jì)算酶活?。

　　?步驟?

　　底物處理：10mL橄欖油乳化后與酶液混合，37℃反應(yīng)1小時(shí)?。

　　終止反應(yīng)：加入95%乙醇終止水解，酚酞指示劑滴定至微紅色?。

　　計(jì)算：酸價(jià)(X)= C×(V?V?)×40/M，

　　C為NaOH濃度，V為滴定體積?。

　　二、分光光度法(銅皂法)

　　?原理?

　　游離脂肪酸與銅離子形成藍(lán)色銅皂，通過(guò)比色法測(cè)定吸光度(如540nm)?。

　　?步驟?

　　反應(yīng)體系：土壤或血清樣本與癸酸底物混合，37℃反應(yīng)1小時(shí)?。

　　顯色：加入硫酸終止反應(yīng)，銅離子溶液顯色后比色?。

　　三、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)

　　適用于臨床血清脂肪酶檢測(cè)，通過(guò)抗體-抗原反應(yīng)定量酶濃度，靈敏度高?。

　　四、自動(dòng)化電位滴定法

　　以甘油三丁酸酯為底物，pH計(jì)監(jiān)測(cè)脂肪酸釋放，適用于胰脂肪酶測(cè)定?。

　　注意事項(xiàng)

　　?樣本處理?：血清檢測(cè)需空腹8-12小時(shí)，避免高脂飲食干擾?。

　　?藥物影響?：肝素、避孕藥等可能影響結(jié)果，需提前停藥?。

　　?溫度控制?：反應(yīng)溫度通常為37℃，需嚴(yán)格校準(zhǔn)?。

　　臨床意義：血清脂肪酶升高(>280U/L)提示急性胰腺炎、胰腺癌等疾病?