1.簡介:
酶聯(lián)免疫吸附實驗,即酶聯(lián)免疫吸附實驗,其基本原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面,加入待檢標(biāo)本,通過酶標(biāo)物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA技術(shù)作為免疫標(biāo)記技術(shù)(包含免疫熒光技術(shù),免疫放射技術(shù),免疫酶技術(shù)和免疫膠體金技術(shù))中的一種,已廣泛應(yīng)用于科研和臨床實驗中,具有快速、定性或者定量甚至定位的特點。
ELISA可用于測定抗原,也可以測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體;②酶標(biāo)記的抗原或抗體;③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測的具備條件,可設(shè)計出各種不同類型的檢驗方法。
2.服務(wù)流程:

1、血清:干燥管(黃色)或促凝管(紅色)收集全血,室溫自然凝固10-20min,離心5-10min(2500-3500rpm/min)。采血過程中應(yīng)避免溶血,仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心;
2、血漿:抗凝管(紫色、黑色、綠色)收集全血,采集后馬上混勻,靜置10min左右,離心5-10min(2500-3500rpm/min)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心;
3、尿液:用無菌管收集,離心10-20min(2500-3500rpm/min),仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心;
4、糞便:用無菌15ml離心管收集, 1g樣本+9ml PBS(0.01M,pH=7.4),充分勻漿完離心5-10min(2500-3500rpm/min),取上清備用;
5、細(xì)胞:檢測分泌性的成份:用無菌管收集,5-10min(2500-3500rpm/min),仔細(xì)收集上清;細(xì)胞內(nèi)指標(biāo):吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,胰酶消化細(xì)胞,收集細(xì)胞沉淀,PBS(0.01M,PH=7.4)清洗一次,PBS稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達到1×107個/ml左右,充分研磨后超聲裂解(或反復(fù)凍融),以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,離心5-10min(2500-3500rpm/min),取上清備用
6、動物組織:用無菌15ml離心管收集, 組織重量不能低于50mg,1g組織加入9ml PBS(0.01M,PH=7.4),手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,勻漿過程中,PBS分2次加進去,這樣勻漿更充分。充分勻漿完離心5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清備用(切勿加入細(xì)胞裂解液)
7、植物組織:用無菌15ml離心管收集, 組織重量不能低于50mg,1g組織加入9ml PBS(0.01M,PH=7.4),手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,勻漿過程中,PBS分2次加進去,這樣勻漿更充分。充分勻漿完離心5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清備用(切勿加入細(xì)胞裂解液)
8、待測指標(biāo)試劑盒(可由公司代購),待測樣品(若不能及時檢測,請將樣品保存于-20℃或按照相應(yīng)說明書要求進行保存,長期保存于-80℃,避免反復(fù)凍融)
1、酶標(biāo)儀檢測出現(xiàn)白板,無信號情況,該如何解決?
原因:試劑已過保護期,不同批次稀釋液交叉使用;洗板機或加樣過程中酶標(biāo)記物被污染失活,稀釋液中含有酶抑制劑;洗滌劑是濃縮型,沒有按比例稀釋。
2、為什么顯色靈敏度低,僅有微弱信號出現(xiàn)?
原因:洗滌劑稀釋倍數(shù)不符合要求,洗板次數(shù)過多,洗板沖擊力太大,洗板浸泡時間過長;底物顯色太短。