Tunel染色 TUNEL凋亡染色作用原理為染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)。適用于組織樣本（石蠟包埋、冰凍切片）和細(xì)胞樣本在單細(xì)胞水平上的凋亡原位檢測(cè)、抗腫瘤藥的藥效評(píng)價(jià)。
細(xì)胞-Tunel染色送樣要求：
客戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇增值服務(wù)，如細(xì)胞培養(yǎng)、樣品處理等。
Tunel染色+熒光拍照標(biāo)本要求：
1. 對(duì)于貼壁細(xì)胞或細(xì)胞涂片，PBS洗滌3次，用4%多聚甲醛固定細(xì)胞30-60分鐘，低溫寄送（冰袋郵寄，防止結(jié)冰）；
2. 對(duì)于懸浮細(xì)胞或細(xì)胞懸液，收集細(xì)胞(不超過(guò)200萬(wàn)細(xì)胞)，PBS洗滌3次，用4%多聚甲醛固定細(xì)胞30-60分鐘，為防止細(xì)胞聚集成團(tuán)，宜在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動(dòng)的同時(shí)進(jìn)行固定。
熒光信號(hào)弱或沒(méi)有熒光信號(hào)
原因1：樣本處理不當(dāng)
（1）樣本切片太厚。建議適當(dāng)將切片切薄一點(diǎn)，便于染色。
（2）脫蠟和水化不充分。建議脫蠟先60 oC 20 min，再使用二甲苯兩次5-10 min；而水化用梯度乙醇從高到低濃度浸洗。
（3）Proteinase K的孵育時(shí)間過(guò)短。優(yōu)化Proteinase K的孵育時(shí)間，常用時(shí)間10-30 min。4 μm左右的片子孵育10 min，30μm左右的片子孵育30 min。
（4）Proteinase K濃度過(guò)低。建議蛋白酶K一般工作液濃度為20 μg/mL。
（5）放置在-20 oC保存較長(zhǎng)時(shí)間的切片不新鮮，減低染色效率。建議使用新鮮切片。
原因2：染色操作不當(dāng)
（1）染色時(shí)間過(guò)短。建議一般 37 oC 孵育60 min，可以根據(jù)凋亡損傷程度，可長(zhǎng)至2 h，但要結(jié)合背景著色。
（2）TdT酶或熒光素/酶標(biāo)記的dUTP濃度過(guò)低。建議適當(dāng)提高TdT酶或熒光素/酶標(biāo)記的dUTP濃度。
（3）TdT酶失活。建議TUNEL反應(yīng)液臨用前配制，短時(shí)間在冰上保存。不宜長(zhǎng)期保存，長(zhǎng)期保存會(huì)導(dǎo)致TdT酶失活。
（4）樣本干燥。加上TUNEL反應(yīng)液后，請(qǐng)蓋上蓋玻片/保鮮膜/濕盒中進(jìn)行，保證樣本均勻染色，又可防止反應(yīng)液干燥。
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儀器型號(hào)
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