生物掃描電鏡主要是用于觀察和分析生物樣品的表面結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)。其工作原理基于電子束與樣品相互作用產(chǎn)生的信號,主要用于獲取樣品表面三維形貌信息,拍攝照片為黑白照片。一般用來觀察細(xì)胞外表面的變形以及受損情況等,也可以觀察材料在細(xì)胞表面的分布情況。
1.送樣要求
(1)細(xì)胞樣品用1.5ml的尖底管,離心成團(tuán)(至少黃豆大小),加入2.5%戊二醛固定液(緩慢加入電鏡固定液,不要將細(xì)胞吹散。若將細(xì)胞吹散,請離心3000轉(zhuǎn),保持細(xì)胞成團(tuán)狀)。固定液加滿離心管,使樣品完全浸沒在固定液中,放置于4°C固定12h后,用泡沫盒加冰袋低溫保存運輸,注意:樣本管與冰袋隔開,固定液切勿冷凍結(jié)冰。 (細(xì)菌樣品要求同細(xì)胞)
(2)塊狀樣品:要求在不影響實驗?zāi)康牡那疤嵯?,觀察面盡量平整,尺寸為厚 2~3mm、長寬 5~6mm。有正反觀察面要求的,制樣前要能夠視覺區(qū)分,不能區(qū)分要在形狀上做標(biāo)記(可在樣本右上角裁剪掉一塊,右上角缺失面是正面(即觀察面),不能用記號筆標(biāo)記)。放置于4°C固定12h后,用泡沫盒加冰袋低溫保存運輸,注意:樣本管與冰袋隔開,固定液切勿冷凍結(jié)冰。
(3)打印填寫完整的實驗預(yù)約單和樣品一起寄送。
2.測試周期:一般為樣品接收后的2-3周左右,如遇法定假期需要順延,具體實驗周期及送樣時間請與e測試工作人員溝通確認(rèn),謝謝!
3.交付數(shù)據(jù):每樣提供8張拍攝圖片(不提供分析服務(wù))。如需更多照片請?zhí)崆芭c工作人員溝通確認(rèn),并且會產(chǎn)生額外費用,請悉知!結(jié)果反饋請在測試完成一周內(nèi),不建議回收樣品,如有需要請?zhí)崆胺答伣oe測試工作人員。
1、不導(dǎo)電或?qū)щ姴畹臉悠?,為什么要噴金?/div>
SEM成像,是通過檢測器獲得二次電子和背散射電子的信號。如樣品不導(dǎo)電或?qū)щ娦圆缓?,會造成樣品表面多余電子或游離粒子的累積不能及時導(dǎo)走,一定程度后就反復(fù)出現(xiàn)充電放電現(xiàn)象(charging),最終影響電子信號的傳遞,造成圖像扭曲,變形、晃動等現(xiàn)象,噴金后樣品表面導(dǎo)電增強,從而避免積電現(xiàn)象。
2、2.5%戊二醛固定液如何配置?
市售25%戊二醛水溶液 10ml
0.1mol/L二甲砷酸鈉 50ml
蒸餾水加至 100ml
3、細(xì)胞原位觀察,怎么準(zhǔn)備樣品?
可以用細(xì)胞爬片(可以區(qū)分正反面。不能用記號筆標(biāo)記)培養(yǎng)細(xì)胞,培養(yǎng)后裝入5mL或者10mL離心管,后續(xù)加滿戊二醛固定液4℃固定12h,低溫保存寄送。
4、為什么有觀察面要求的樣本不能用記號筆標(biāo)記?
因為制樣過程中會用到酒精脫水,記號筆標(biāo)記會被洗掉;因此只能通過裁剪標(biāo)記或者樣本形狀上能明顯區(qū)分正反面。