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HE染色,全稱為蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin and Eosin staining),是組織學(xué)中最常用的一種染色方法。它通過使用兩種主要染料——蘇木精和伊紅對(duì)生物樣本進(jìn)行染色,以便在顯微鏡下觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組織形態(tài)。以下是HE染色的基本原理及其步驟:
基本原理
蘇木精染色:
蘇木精是一種堿性染料,能夠與細(xì)胞核內(nèi)的酸性物質(zhì)結(jié)合,主要是與染色質(zhì)中的DNA以及核糖體RNA相結(jié)合。
這些酸性物質(zhì)通常被稱為嗜堿性(basophilic),因?yàn)樗鼈內(nèi)菀捉邮芑颉跋矏邸眽A性染料。因此,在HE染色過程中,細(xì)胞核及富含RNA的區(qū)域(如粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng))會(huì)被蘇木精染成藍(lán)紫色。
伊紅染色:
伊紅是一種酸性染料,可以與細(xì)胞漿和其他細(xì)胞外基質(zhì)中的堿性成分結(jié)合,比如蛋白質(zhì)。
細(xì)胞漿和細(xì)胞外基質(zhì)中的這些成分通常是嗜酸性的(acidophilic),即傾向于結(jié)合酸性染料。在HE染色中,這些部分會(huì)被伊紅染成不同程度的粉紅色至紅色。
染色過程概述
盡管具體的HE染色程序可能因?qū)嶒?yàn)室的具體條件而略有不同,但基本流程大致如下:
脫蠟和水化:如果使用的是石蠟包埋的切片,則首先需要通過一系列溶劑去除石蠟,并逐步將切片水化。
蘇木精染色:將切片浸入蘇木精溶液中一段時(shí)間(通常幾分鐘),使細(xì)胞核及其他嗜堿性結(jié)構(gòu)著色。
分化:用酸性酒精溶液處理以去除過量的蘇木精并增強(qiáng)對(duì)比度,這一過程被稱為“分化”。之后需用水充分沖洗切片以終止分化作用。
藍(lán)化:為了使蘇木精染上的顏色更加鮮明,常會(huì)用弱堿性溶液(如氨水或溫水)處理切片,這個(gè)步驟也叫“藍(lán)化”。
伊紅染色:隨后將切片放入伊紅溶液中浸泡,使細(xì)胞質(zhì)和其他嗜酸性結(jié)構(gòu)染上顏色。
脫水、透明和封片:最后,通過一系列遞增濃度的乙醇脫水,再用二甲苯或其他透明劑透明處理,然后用樹脂封片劑固定蓋玻片完成整個(gè)過程。
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