冰凍切片HE染色(Frozen Section H&E Staining) 是一種常用于術(shù)中快速病理診斷的組織染色方法。與常規(guī)石蠟切片不同，冰凍切片無需長(zhǎng)時(shí)間的脫水、透明和浸蠟過程，可在短時(shí)間內(nèi)完成組織切片和染色，適用于需要快速獲得病理結(jié)果的情況，如手術(shù)中判斷腫瘤邊界等。

　　一、冰凍切片HE染色的原理

　　1. 蘇木精染色(Hematoxylin)

　　作用對(duì)象：細(xì)胞核中的DNA和RNA。

　　染色效果：呈藍(lán)紫色或深藍(lán)色。

　　機(jī)制：蘇木精為堿性染料，可與酸性物質(zhì)結(jié)合(嗜堿性)。

　　2. 伊紅染色(Eosin)

　　作用對(duì)象：細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)(如肌動(dòng)蛋白、酶類)、膠原纖維等。

　　染色效果：呈粉紅色至紅色。

　　機(jī)制：伊紅為酸性染料，可與堿性成分結(jié)合(嗜酸性)。

　　二、冰凍切片HE染色的優(yōu)點(diǎn)

　　優(yōu)點(diǎn) 描述

　　快速 整個(gè)過程通常在30分鐘內(nèi)完成

　　不需脫蠟 避免了石蠟切片繁瑣的脫蠟步驟

　　保存抗原性 更適合后續(xù)免疫組化或熒光染色

　　保留脂類 可較好地保存脂肪、酶類等易溶于有機(jī)溶劑的成分

　　三、冰凍切片HE染色的操作流程(以冷凍組織切片為例)

　　所有操作應(yīng)在通風(fēng)良好的環(huán)境中進(jìn)行，并佩戴防護(hù)裝備。

　　1. 樣本準(zhǔn)備

　　將新鮮組織迅速放入OCT包埋劑中，置于液氮中速凍。

　　放入冰凍切片機(jī)(Cryostat)中，切成5~8 μm厚度的切片。

　　將切片貼附在載玻片上，室溫晾干數(shù)分鐘。

　　2. 固定(可選)

　　用95%乙醇或丙酮固定切片約30秒至1分鐘，增強(qiáng)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。

　　空氣干燥。

　　3. 蘇木精染色

　　將切片浸入蘇木精染液中染色約30秒至1分鐘。

　　自來水沖洗去除多余染液。

　　4. 分化(可選)

　　使用1%鹽酸酒精分化幾秒鐘，使細(xì)胞核更清晰。

　　自來水沖洗終止反應(yīng)。

　　5. 藍(lán)化

　　浸入弱堿性溶液(如氨水或流水沖洗)約10~30秒，使細(xì)胞核顏色變藍(lán)。

　　再次自來水沖洗。

　　6. 伊紅染色

　　浸入伊紅染液中染色約30秒至1分鐘。

　　染色時(shí)間可根據(jù)染液濃度調(diào)整。

　　7. 脫水透明

　　快速通過梯度乙醇(70% → 95% → 100%)各約10秒。

　　二甲苯或其他透明劑中浸泡1~2分鐘。

　　8. 封片

　　滴加中性樹膠或DPX封片劑，蓋上蓋玻片后封固。

　　四、冰凍切片HE染色注意事項(xiàng)