?一、線粒體超微結(jié)構(gòu)特征?

　　?正常線粒體形態(tài)?

　　?雙層膜結(jié)構(gòu)?：外膜光滑連續(xù)，內(nèi)膜向內(nèi)折疊形成嵴(cristae)，嵴呈板層狀或管狀排列?。

　　?基質(zhì)特征?：基質(zhì)電子密度均勻，可見線粒體基質(zhì)顆粒(ATP合成酶復(fù)合體)?。

　　?病理狀態(tài)識別?

　　?線粒體腫脹?：嵴斷裂或消失，基質(zhì)電子密度降低(常見于缺氧或代謝紊亂)?。

　　?自噬體包裹?：受損線粒體被自噬膜包裹，形成空泡狀結(jié)構(gòu)(如脂滴蓄積或氧化應(yīng)激)?。

　　?二、TEM實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵步驟?

　　?樣本制備?

　　?固定?：2.5%戊二醛+1%鋨酸雙重固定，保持線粒體結(jié)構(gòu)完整性?。

　　?超薄切片?：環(huán)氧樹脂包埋后，切片厚度控制在50-100nm?。

　　?染色與成像?

　　?染色?：醋酸鈾+檸檬酸鉛雙重染色增強(qiáng)對比度?。

　　?觀察模式?：低倍鏡(2000×)定位線粒體，高倍鏡(50000×)觀察嵴細(xì)節(jié)?。

　　?三、典型結(jié)果分析?

　　?健康線粒體?

　　呈桿狀或啞鈴形，嵴結(jié)構(gòu)清晰，基質(zhì)顆粒密集?。

　　?損傷線粒體?

　　嵴斷裂、外膜模糊，基質(zhì)空泡化(如誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡模型)?。

　　?四、技術(shù)優(yōu)化建議?

　　?分辨率提升?

　　使用場發(fā)射TEM(分辨率可達(dá)0.5nm)觀察心肌等致密組織?。

　　?數(shù)據(jù)分析?

　　通過DigitalMicrograph軟件測量晶面間距(如嵴間距)?。

　　?五、常見問題與解決方案?

　　?圖像模糊?

　　?原因?：切片過厚或染色不均。

　　?解決?：調(diào)整切片厚度至70nm以下，優(yōu)化染色時間?。

　　?結(jié)構(gòu)缺失?

　　?原因?：固定不及時導(dǎo)致降解。

　　?解決?：樣本采集后立即預(yù)固定(4℃戊二醛)