TUNEL染色是一種用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡的技術(shù)，全稱為“脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法”(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Mediated dUTP Nick End Labeling)。這項(xiàng)技術(shù)基于細(xì)胞凋亡過(guò)程中DNA的斷裂，產(chǎn)生大量的3'-OH末端。通過(guò)脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用，可以將熒光素、過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素標(biāo)記的脫氧核糖核苷酸標(biāo)記到這些3'-OH末端上，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)凋亡細(xì)胞的可視化檢測(cè)。

　　TUNEL染色的操作步驟

　　樣本制備：如果是組織樣本，通常需要制作成石蠟切片或冷凍切片。

　　脫蠟和水化：如果是石蠟切片，需要用二甲苯脫蠟并經(jīng)過(guò)不同濃度的乙醇進(jìn)行水化。

　　洗滌：用PBS(磷酸鹽緩沖液)洗滌數(shù)次，去除殘留的有機(jī)溶劑。

　　蛋白酶K處理：使用蛋白酶K處理樣本，幫助TdT更好地接近DNA末端。

　　洗滌：再次用PBS洗滌去除多余的蛋白酶K。

　　TUNEL反應(yīng)：加入含有TdT和熒光素標(biāo)記dUTP的混合物，讓其與DNA的3'-OH末端反應(yīng)。

　　封固：用適當(dāng)?shù)姆夤虅┓夤虡颖尽?/p>

　　檢測(cè)：使用熒光顯微鏡觀察并拍照記錄。