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SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate - Polyacrylamide Gel Electrophoresis)是一種常用的蛋白質(zhì)分析技術(shù),廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)以及蛋白質(zhì)組學(xué)研究中。這項(xiàng)技術(shù)z初由烏爾里希和考伯斯在1967年提出,它利用了聚丙烯酰胺凝膠作為分離介質(zhì),并借助十二烷基硫酸鈉(SDS)和β-巰基乙醇等試劑使蛋白質(zhì)變性及電荷均一化,從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)根據(jù)其分子量大小進(jìn)行分離的目的。下面是對(duì)SDS-PAGE技術(shù)的詳細(xì)說明:
原理
蛋白質(zhì)變性與電荷均一化:SDS是一種陰離子去污劑,能夠破壞蛋白質(zhì)的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu),使其完全變性并形成線性結(jié)構(gòu)。同時(shí),SDS與蛋白質(zhì)按一定比例結(jié)合(大約1.4g SDS/1g蛋白質(zhì)),為每個(gè)氨基酸殘基提供一個(gè)負(fù)電荷,從而使蛋白質(zhì)的電荷與分子量直接相關(guān),而與其原有的電荷狀態(tài)無關(guān)。
聚丙烯酰胺凝膠:凝膠由兩部分組成,濃度不同的分離膠和濃縮膠。濃縮膠具有較低的聚丙烯酰胺濃度,通常含有一定梯度的氯化物或甘氨酸,形成電荷對(duì)峙層,幫助樣品集中成一條窄帶進(jìn)入分離膠;分離膠則具有更高的聚丙烯酰胺濃度,用于根據(jù)蛋白質(zhì)分子量進(jìn)行精確分離。
電泳過程:在電場作用下,蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物因其均勻的負(fù)電荷而在凝膠中向正極遷移,分子量小的蛋白移動(dòng)得更快,分子量大的蛋白移動(dòng)得更慢,從而實(shí)現(xiàn)按分子量從低到高分離。
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