內(nèi)參蛋白是用來確保蛋白上樣量一致性，量化目的蛋白的表達(dá)情況，是免疫印跡(WB)和免疫熒光(IF)等實驗結(jié)果定量分析或定性比較的重要標(biāo)尺。

　　如何選擇內(nèi)參蛋白?

　　內(nèi)參蛋白主要是一些持家基因，這些持家基因執(zhí)行大量的基本功能，并持續(xù)在多種組織和細(xì)胞中高水平表達(dá)。 常見內(nèi)參蛋白包括 Actin、Tubulin、GAPDH、Histone H3 等。但是，研究不同類型的蛋白，對內(nèi)參的選擇是有講究的，如：

　　1. 胞漿蛋白的內(nèi)參與胞核蛋白的內(nèi)參是不一樣的;

　　2. 在一定的實驗條件下，內(nèi)參蛋白的表達(dá)發(fā)生明顯的變化時需要選擇其他表達(dá)不變或者變化很小的蛋白;

　　3. 當(dāng)研究的蛋白的分子量與內(nèi)參接近時，需要選擇分子量與目的蛋白的分子量差距比較大的蛋白。

　　多數(shù)情況下，內(nèi)參蛋白的表達(dá)量很高且穩(wěn)定，但是，特定的實驗條件(環(huán)境壓力，外界因素刺激等)會引起這些內(nèi)參蛋白的變化，因此有些內(nèi)參在不同實驗條件或研究模型下不適合選擇，網(wǎng)上總結(jié)了最近研究的結(jié)果，列出有些實驗條件下不合適的內(nèi)參供參考：

　　1. 研究結(jié)腸癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移時，細(xì)胞骨架蛋白 Vinculin 不適合做全細(xì)胞的內(nèi)參。近期研究表明，結(jié)腸癌中 Vinculin 表達(dá)的減少和增加與致癌和轉(zhuǎn)移有關(guān)聯(lián)1。

　　2. 在環(huán)境壓力下，HSP70 和 HSP90 被誘導(dǎo)而表達(dá)發(fā)生變化，盡管 HSP70 和 HSP90 正常情況下是組成性表達(dá)的分子伴侶，能夠保持蛋白合成穩(wěn)態(tài)，但環(huán)境壓力下，HSP70 和 HSP90 不適合胞漿蛋白的內(nèi)參。

　　3. 當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡的時候，核多聚 (ADP-核糖) 聚合酶 PARP 和核膜的結(jié)構(gòu)組分 Lamins，都不適合做核蛋白的內(nèi)參。在凋亡細(xì)胞體內(nèi)，PARP 是 caspase-3 裂解的主要靶蛋白之一3。Lamin A/C 能夠被 caspase-6 切割，可以作為 caspase-6 激活的標(biāo)志。在凋亡過程中，Lamin A/C 能夠被特異地剪切成大片段 (41-50 kDa) 和小片段 (28 kDa)。Lamin 的剪切會引起細(xì)胞核的失調(diào)和細(xì)胞死亡4,5。

　　4. VDAC (電壓依賴性陰離子通道) 廣泛表達(dá)，定位于線粒體外膜，通常認(rèn)為這是代謝傳入或傳出線粒體的主要方式。另外，這個通道在凋亡信號中發(fā)揮重要作用。Bcl-2 家族蛋白調(diào)控凋亡過程中線粒體通透性的改變，他們能結(jié)合 VDAC 改變通道的動力6。VDAC 的同二聚體化可能是一種改變線粒體通透性和促進(jìn)細(xì)胞色素 C 釋放的機制。

　　5. Cofilin 屬于一組保守的小 Actin-結(jié)合蛋白家族，在胞質(zhì)分裂，內(nèi)吞，胚胎發(fā)育，壓力應(yīng)激和組織再生過程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。在刺激因素作用下，Cofilin 作為提前存在的細(xì)絲促進(jìn) Actin 肌動蛋白絲的再生7。Cofilin 的第 3 位絲氨酸被 LIMK 或 TESK 磷酸化后會抑制 Cofilin 的這種作用8。

　　6. Actin ，一種廣泛表達(dá)的真核蛋白，是細(xì)胞骨架的重要組分。研究證明在原始乳腺癌細(xì)胞中 Actin 是高度磷酸化的9。研究也發(fā)現(xiàn)凋亡條件下，心臟肌肉以及骨骼肌中都能觀察到 beta-Actin 的清除10，因此，beta-Actin 不適用于心臟和骨骼肌的樣品。心肌和骨骼肌樣本可以用 alpha-Actin 做內(nèi)參。Caspase-3 對 Actin 的清除會加速泛素/蛋白酶體依賴的肌肉蛋白酶解11。 細(xì)胞生長條件的改變以及與胞外基質(zhì)組分的相互作用都可能會導(dǎo)致 Actin 蛋白合成的變化 。

　　7. GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶), 在糖酵解過程中將 3-磷酸甘油醛進(jìn)一步磷酸化。雖然在不同組織中的表達(dá)水平有差異，但 GAPDH 普遍被認(rèn)為是一個組成型表達(dá)的持家蛋白。正是由于這個原因，GAPDH 的 mRNA 和蛋白通常在對其它有變化的靶蛋白測定實驗時作為對照。當(dāng)代謝信號通路受到影響時 GAPDH 不適合做內(nèi)參等。

　　8. 球形微管蛋白亞基包含微管建筑塊，由 α/β-tubulin 異源二聚體形成所有真核細(xì)胞的 tubulin 亞單位。 對抗微生物和抗有絲分裂藥物耐受性的不同而會導(dǎo)致 Tubulin 的表達(dá)發(fā)生變化 。