免疫印跡(Western blot)是一種常用的分析蛋白質(zhì)的方法。通過(guò)該技術(shù)，可以檢測(cè)出任何相關(guān)的蛋白質(zhì)并通過(guò)量化來(lái)判斷其含量。

　　第一步：樣品提取

　　在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，我們需要收集我們需要檢測(cè)的蛋白質(zhì)的樣品。對(duì)于細(xì)胞樣品，可以使用生理鹽水或緩沖液洗滌。對(duì)于組織樣品，你需要首先使用組織破碎液來(lái)破碎并提取蛋白質(zhì)。隨后，將樣品制成離心管并在-80°C冷藏保存。

　　第二步：SDS-PAGE

　　第二步是將樣品分離。分離基于SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)技術(shù)。通過(guò)SDS-PAGE，蛋白質(zhì)被分離成幾個(gè)不同大小的片段，這些片段被稱為條帶。條帶按照大小電泳在凝膠上。精細(xì)的凝膠濃度和凝膠大小可以影響分離效果。

　　第三步：轉(zhuǎn)移膜

　　轉(zhuǎn)移膜是將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到可以檢測(cè)的膜上的步驟。這個(gè)步驟主要是為了使檢測(cè)更方便。常用的轉(zhuǎn)移膜包括尼龍膜和聚丙烯酰胺膜。轉(zhuǎn)移膜通常比凝膠小，所以必須將凝膠和轉(zhuǎn)移膜正確的對(duì)齊。

　　第四步：免疫檢測(cè)

　　免疫檢測(cè)是檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的部分。通過(guò)使用特定的一次性抗體和標(biāo)記蛋白(如辣根過(guò)氧化物酶)，可以檢測(cè)到與蛋白質(zhì)相關(guān)的分子量。免疫檢測(cè)可以對(duì)膜上的單個(gè)過(guò)程進(jìn)行評(píng)估，并使蛋白質(zhì)定量非常準(zhǔn)確。

　　WB免疫印記檢測(cè)實(shí)驗(yàn)技巧

　　在實(shí)驗(yàn)中遵循以下步驟可以幫助你更好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：

　　1.使用新鮮的試劑：避免使用舊試劑，否則可能會(huì)影響檢測(cè)能力。

　　2.平衡染色：進(jìn)行大量凝膠分析時(shí)，有時(shí)染色不平衡，將影響條帶的清晰度，因此必須非常小心和謹(jǐn)慎。

　　3.注意質(zhì)量控制：為確保每個(gè)實(shí)驗(yàn)周期順利，互相關(guān)聯(lián)，必須進(jìn)行定期質(zhì)量控制。