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原位雜交(In Situ Hybridization, ISH)是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于定位特定的核酸序列(DNA或RNA)在細(xì)胞或組織中的位置。通過將標(biāo)記的單鏈核酸探針與目標(biāo)核酸序列雜交,可以檢測特定基因的表達(dá)模式或病毒DNA的存在。這種方法廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、臨床診斷和藥物開發(fā)等多個領(lǐng)域。
原位雜交的基本步驟包括:
樣本準(zhǔn)備:獲取組織或細(xì)胞樣本,并通過固定、脫水等步驟處理。
預(yù)雜交:對樣本進行預(yù)處理,以減少背景信號并提高雜交效率。
雜交:將標(biāo)記的探針與樣本在適宜條件下進行雜交。
洗滌:去除未結(jié)合的探針,保留雜交復(fù)合物。
信號檢測:通過放射自顯影或酶促反應(yīng)(如顯色或熒光)來檢測信號。
觀察與分析:使用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡觀察樣本,并分析結(jié)果。
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