1、細(xì)胞劃痕

　　實驗流程如下：

　　(1)先用marker筆在6孔板背后，直尺比著，均勻得劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。

　　(2)在孔中加入計數(shù)好的細(xì)胞，具體數(shù)量因細(xì)胞不同而定(過夜能鋪滿即可)。

　　(3)第二天用槍頭比著直尺，盡量垂至于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜。

　　(4)用PBS洗細(xì)胞3次，去處劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基。

　　(5)放入37度5%二氧化碳培養(yǎng)箱，培養(yǎng)0，6，12，24小時后取樣，拍照。

　　注意：所有能滅菌的器械都要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內(nèi))。

　　2、Transwell法

　　實驗流程如下：

　　(1) 換無血清或低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，排除血清的影響。

　　(2)鋪下室培養(yǎng)基：下室鋪培養(yǎng)基(液體需剛剛好);

　　制備細(xì)胞懸液：使用胰酶消化細(xì)胞，制備細(xì)胞懸液;

　　鋪上室細(xì)胞：將上層小室放入下層小室，將細(xì)胞鋪在上層小室中。

　　(3)繼續(xù)培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24-48 小時，具體時間根據(jù)不同細(xì)胞而定。

　　(4)染色：先使用固定液固定細(xì)胞(防止細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變)，然后使用結(jié)晶紫進(jìn)行染色。

　　(5)拍攝及數(shù)據(jù)分析。