在進(jìn)行石蠟切片的免疫熒光染色時(shí)，通常需要進(jìn)行所謂的“破膜”處理，這實(shí)際上是指抗原修復(fù)過(guò)程。雖然這個(gè)步驟的主要目的是恢復(fù)因固定和石蠟包埋過(guò)程中可能被遮蔽或變性的抗原表位，但它同時(shí)也幫助了抗體更好地穿透組織結(jié)構(gòu)到達(dá)目標(biāo)抗原，因?yàn)榧?xì)胞膜和其他細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)在這些處理過(guò)程中也會(huì)變得更為通透。

　　抗原修復(fù)與破膜

　　抗原修復(fù)：由于石蠟切片制作過(guò)程中涉及的固定(如甲醛)和脫水步驟可能會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)交聯(lián)，掩蓋抗原決定簇，使得抗體無(wú)法有效結(jié)合。因此，需要通過(guò)抗原修復(fù)來(lái)逆轉(zhuǎn)這種效應(yīng)，使抗原表位重新暴露。

　　熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)(HIER)：使用緩沖液(如檸檬酸緩沖液pH6.0或EDTA緩沖液pH8.0-9.0)在微波爐、高壓鍋或水浴中加熱處理切片。

　　酶誘導(dǎo)抗原修復(fù)(PIER)：利用特定的酶(如胰蛋白酶、胃蛋白酶等)消化組織，幫助打開(kāi)蛋白質(zhì)間的交聯(lián)。

　　增加抗體穿透性：上述抗原修復(fù)過(guò)程不僅有助于恢復(fù)抗原表位，同時(shí)也能增加組織的通透性，讓抗體更容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。然而，對(duì)于某些特定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，如果目標(biāo)抗原位于細(xì)胞膜上或者只需要檢測(cè)表面抗原，則可能不需要強(qiáng)烈的抗原修復(fù)步驟。

　　注意事項(xiàng)

　　在選擇抗原修復(fù)方法時(shí)，應(yīng)考慮目標(biāo)抗原的性質(zhì)以及所使用的抗體類型，不同的抗原可能需要不同的修復(fù)條件才能達(dá)到z佳效果。

　　操作時(shí)需小心控制溫度和時(shí)間，避免過(guò)度處理導(dǎo)致組織損傷或抗原破壞。

　　完成抗原修復(fù)后，通常還需要進(jìn)行封閉步驟以減少非特異性結(jié)合，提高染色特異性和信噪比。