Transwell實(shí)驗(yàn)是一種廣泛應(yīng)用的細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)，主要用于研究細(xì)胞遷移、侵襲和趨化性等過(guò)程。這項(xiàng)技術(shù)依賴于一種特殊的培養(yǎng)皿——Transwell小室，它由一個(gè)具有微孔膜的插件組成，該插件可以放置在一個(gè)24孔或更高密度的多孔板中。通過(guò)這種設(shè)計(jì)，可以在上下兩層之間形成濃度梯度或者物理屏障，從而模擬體內(nèi)環(huán)境下的細(xì)胞行為。

　　Transwell實(shí)驗(yàn)的主要應(yīng)用

　　細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)：用于評(píng)估細(xì)胞在化學(xué)誘導(dǎo)劑(如生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子)引導(dǎo)下穿過(guò)膜的能力。

　　細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)：除了遷移能力外，還可以考察細(xì)胞穿透基質(zhì)的能力。通常會(huì)在膜上覆蓋一層基質(zhì)膠(Matrigel)，以模仿體內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)環(huán)境。

　　趨化性實(shí)驗(yàn)：研究細(xì)胞對(duì)外界化學(xué)信號(hào)的反應(yīng)，例如特定化學(xué)物質(zhì)對(duì)細(xì)胞移動(dòng)方向的影響。

　　實(shí)驗(yàn)步驟概述

　　準(zhǔn)備階段

　　選擇合適的Transwell小室：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇不同孔徑大小的膜(如8μm適合大多數(shù)細(xì)胞類型)以及是否需要預(yù)涂基質(zhì)膠。

　　制備細(xì)胞懸液：將目標(biāo)細(xì)胞消化后計(jì)數(shù)，并調(diào)整至適當(dāng)?shù)臐舛取?/p>

　　操作流程

　　設(shè)置Transwell小室：如果進(jìn)行侵襲實(shí)驗(yàn)，則需先在膜上均勻涂抹基質(zhì)膠，并允許其凝固。

　　接種細(xì)胞：將適量的細(xì)胞懸液加入到Transwell小室的上腔室內(nèi)，同時(shí)在下腔室加入含有吸引物(如血清、特定配體)的培養(yǎng)基。

　　孵育：將整個(gè)裝置置于CO?培養(yǎng)箱內(nèi)，在適宜條件下孵育一段時(shí)間(時(shí)間長(zhǎng)短取決于細(xì)胞類型及其活性)。

　　染色與觀察：

　　遷移/侵襲完成后，取出Transwell小室，去除未遷移的細(xì)胞。

　　對(duì)已遷移的細(xì)胞進(jìn)行固定和染色(常用結(jié)晶紫染色)。

　　可以直接在顯微鏡下觀察，也可以進(jìn)一步溶解染料并通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)量吸光度來(lái)量化遷移細(xì)胞的數(shù)量。

　　數(shù)據(jù)分析：比較不同處理組之間的細(xì)胞遷移或侵襲差異，分析變量對(duì)細(xì)胞行為的影響。

　　注意事項(xiàng)

　　確保所有使用的試劑無(wú)菌且操作環(huán)境潔凈，避免污染。

　　根據(jù)具體的細(xì)胞類型調(diào)整細(xì)胞數(shù)量和孵育時(shí)間。

　　在進(jìn)行侵襲實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意基質(zhì)膠的處理?xiàng)l件，確保其均勻分布并完全固化。