冰凍切片后染色是一種常用的組織學(xué)技術(shù)，用于在低溫條件下快速制備組織切片并進(jìn)行染色。以下是常見的步驟：

　　1. 組織準(zhǔn)備

　　取材：從生物樣本中取出組織，盡快處理以防降解。

　　冷凍：將組織放入冷凍介質(zhì)(如OCT化合物)，在液氮或低溫冷凍機(jī)中迅速冷凍，以保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)。

　　2. 切片

　　切片機(jī)：使用冷凍切片機(jī)在-20°C左右將組織切成5-10微米的薄片。

　　貼片：將切片貼在載玻片上，室溫晾干或使用固定劑固定。

　　3. 固定

　　固定劑：常用4%多聚甲醛或丙酮，固定5-10分鐘，保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)并增強(qiáng)染色效果。

　　4. 染色

　　染色方法：根據(jù)研究目的選擇染色方法，如H&E染色、免疫組化染色等。

　　步驟：

　　脫蠟：若使用固定劑，需先脫蠟。

　　染色：按染色方案進(jìn)行，如H&E染色中的蘇木精和伊紅。

　　洗滌：用緩沖液或蒸餾水洗去多余染料。

　　脫水：通過梯度酒精脫水。

　　透明：使用二甲苯透明。

　　封片：用封片劑封片。

　　5. 觀察

　　顯微鏡：封片后，用光學(xué)顯微鏡觀察染色結(jié)果。

　　注意事項(xiàng)

　　速度：快速操作，防止組織降解。

　　溫度：保持低溫，避免冰晶形成。

　　試劑：確保試劑新鮮，避免影響染色效果。

　　常見問題

　　冰晶形成：冷凍不迅速可能導(dǎo)致冰晶，影響切片質(zhì)量。

　　染色不均：固定或染色時(shí)間不當(dāng)可能導(dǎo)致染色不均。