1)細胞總蛋白的提取：

　?、偈占毎?，加入適量的預(yù)冷的PBS洗滌細胞，然后棄去洗液，重復(fù)上述步驟三次。收集細胞沉淀放置于冰上。

　?、谙蚣毎恋矸N加入含有PMSF的100 μl裂解液，在冰上的裂解30分鐘。在裂解過程中，要定期輕輕彈動以確保細胞充分裂解。

　?、凼占呀庖旱?.5 ml 離心管中，在4℃下進行12000 rpm離心5分鐘。

　?、軐㈦x心后的上清分裝至0.5 ml 離心管中，將樣品于沸水中煮5 min使蛋白變性，迅速轉(zhuǎn)移到-20℃保存。

　　(2)組織中總蛋白的提?。?/b>

　　①取少量組織塊，使用清潔的剪刀將組織塊徹底剪碎。

　?、谙騽驖{器中加入500 ul含有PMSF的裂解液，進行勻漿。隨后將勻漿器置于冰上。

　　③5-10分鐘后，再次進行碾磨，然后再次放置于冰上。這個過程需要重復(fù)幾次，以確保組織塊充分碾碎。

　?、芰呀?0分鐘后，使用移液器將裂解液轉(zhuǎn)移至1.5 ml 離心管中。隨后，在4℃下進行12000 rpm離心5分鐘，將上清液分裝至0.5 ml 離心管中，將樣品于沸水中煮5 min使蛋白變性，并存放于-20℃。