①細(xì)胞培養(yǎng)處理

　　用6孔板培養(yǎng)細(xì)胞，待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到60%-70%，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求處理(比如加入藥物)，繼續(xù)培養(yǎng);

　?、诩?xì)胞收集

　　用胰酶消化細(xì)胞，吹打成單細(xì)胞懸液，800rpm離心5min,收集細(xì)胞沉淀，上清保留，用預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞，制備成單細(xì)胞懸液;

　?、奂?xì)胞固定

　　制備的單細(xì)胞懸液離心后，去除上清，加入2-3ml預(yù)冷70%乙醇，于-20℃固定16h以上;

　　④細(xì)胞染色

　　1000rpm 離心5min 后棄上清，用2ml的PBS洗滌2次(注意避免Dnase污染),加入適量的周期染料，37C避光孵育30min;

　　⑤上機(jī)前過(guò)濾

　　PI具有很強(qiáng)的粘附性,容易形成細(xì)胞聚團(tuán)，建議可以使用200目的篩網(wǎng)過(guò)濾樣本后上機(jī);

　　⑥上機(jī)分析

　　低速上樣本，建議有效的單個(gè)細(xì)胞采集10000個(gè)以上;