1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

　　樣品制備：準(zhǔn)備目標(biāo)蛋白質(zhì)和潛在配體(如小分子化合物或生物分子)的溶液。

　　標(biāo)記：通常需要對(duì)其中一個(gè)分子(通常是蛋白質(zhì))進(jìn)行熒光標(biāo)記，以便跟蹤其在溫度梯度中的遷移。

　　濃度系列制備：制備一系列不同濃度的配體溶液，以構(gòu)建劑量響應(yīng)曲線。

　　2. 實(shí)驗(yàn)操作

　　溫度梯度建立：將樣品溶液置于MST儀器的特殊試管中，在試管的一端產(chǎn)生溫度梯度。

　　激光照射：使用激光照射樣品溶液，產(chǎn)生溫度梯度。

　　熒光檢測(cè)：通過(guò)檢測(cè)熒光標(biāo)記分子在溫度梯度中的遷移，記錄熒光強(qiáng)度的變化。

　　3. 數(shù)據(jù)分析

　　數(shù)據(jù)收集：收集不同濃度下的熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)。

　　計(jì)算親和力：使用軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，以計(jì)算結(jié)合常數(shù)(Kd值)，這是衡量分子間相互作用強(qiáng)度的一個(gè)重要參數(shù)。

　　結(jié)果解讀：根據(jù)Kd值和其他相關(guān)參數(shù)來(lái)評(píng)估分子間的結(jié)合特性和動(dòng)力學(xué)。

　　應(yīng)用領(lǐng)域

　　藥物發(fā)現(xiàn)：評(píng)估小分子藥物候選物與靶標(biāo)蛋白的結(jié)合能力。

　　蛋白質(zhì)相互作用研究：研究蛋白質(zhì)與其他蛋白質(zhì)、核酸或小分子之間的相互作用。

　　抗體篩選：篩選針對(duì)特定抗原的高效抗體。

　　表征分子復(fù)合體：了解分子復(fù)合體的形成和穩(wěn)定性。

　　注意事項(xiàng)

　　樣品質(zhì)量：確保使用的蛋白質(zhì)和配體樣品具有良好的純度和活性。

　　濃度選擇：合理選擇配體的濃度范圍，以確保可以獲得良好的劑量響應(yīng)曲線。

　　實(shí)驗(yàn)條件：控制實(shí)驗(yàn)條件(如溫度、pH值等)，以保證數(shù)據(jù)的可靠性和重現(xiàn)性。