單克隆抗體制備是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，涉及多個(gè)步驟。以下是單克隆抗體制備的基本步驟概述：

　　抗原提純與動(dòng)物免疫

　　選擇并純化所需的抗原。

　　使用弗氏完全佐劑(CFA)進(jìn)行初次免疫，之后使用弗氏不完全佐劑(IFA)進(jìn)行加強(qiáng)免疫。

　　免疫小鼠(通常為BALB/c小鼠)，監(jiān)測(cè)抗體水平。

　　骨髓瘤細(xì)胞及飼養(yǎng)細(xì)胞的制備

　　選擇合適的骨髓瘤細(xì)胞系(如Sp2/0細(xì)胞株)，該細(xì)胞系應(yīng)不分泌免疫球蛋白。

　　準(zhǔn)備處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的骨髓瘤細(xì)胞，以確保細(xì)胞活性。

　　細(xì)胞融合

　　從免疫后的小鼠脾臟中分離B淋巴細(xì)胞。

　　使用化學(xué)試劑聚乙二醇(PEG)促進(jìn)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合。

　　篩選出雜交瘤細(xì)胞，這些細(xì)胞同時(shí)具備骨髓瘤細(xì)胞的無(wú)限增殖能力和B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力。

　　篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞

　　在含有次黃嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶核苷(HAT)的選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)融合細(xì)胞，只有雜交瘤細(xì)胞能在這種培養(yǎng)基中存活。

　　通過(guò)有限稀釋法將雜交瘤細(xì)胞克隆化，確保每個(gè)孔中只有一個(gè)細(xì)胞。

　　使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)檢測(cè)各克隆產(chǎn)生的抗體，并選擇那些產(chǎn)生特異性抗體的克隆進(jìn)行進(jìn)一步培養(yǎng)。

　　單克隆抗體的制備

　　對(duì)選定的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，或者將其接種到小鼠腹腔中誘導(dǎo)腹水形成，從中提取抗體。

　　從細(xì)胞培養(yǎng)上清或腹水中純化單克隆抗體。

　　抗體的鑒定與表征

　　確定抗體的特異性、親和力和其他特性。

　　對(duì)最終產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量控制測(cè)試。

　　抗體的保存

　　將單克隆抗體凍存以供將來(lái)使用。